檢測(cè)飲用水中腸球菌的方法

2023-02-01 17:06:50 admin

水中的腸球菌也被稱為革蘭陽(yáng)性球菌，此類(lèi)菌種廣泛的分布于自然環(huán)境及人、動(dòng)物等消化道內(nèi)。因此在常見(jiàn)的地表水也有此類(lèi)菌種的存在，目前針對(duì)腸球菌的檢測(cè)可以采用很多方法，例如常用的平板計(jì)數(shù)法、最近似值測(cè)定法以及酶底物法。而今天我們要了解的就是利用酶底物法檢測(cè)飲用水中腸球菌的具體步驟。
其原理是腸球菌在41℃溫度條件下培養(yǎng)24h，能夠產(chǎn)生β-D-葡糖苷酶，將選擇性培養(yǎng)基中熒光底物4-甲基傘形酮β-D-葡糖苷（4-MUG）分解，分解后的熒光底物在366nm紫外光下產(chǎn)生熒光，統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性反應(yīng)數(shù)量，通過(guò)查詢MPN表，計(jì)算樣品中的腸球菌濃度。

檢測(cè)試劑及材料

1.市售Enterolert 培養(yǎng)基，也可以使用其他等效產(chǎn)品。
2. 生理鹽水:氯化鈉濃度為0.85%。
3.標(biāo)準(zhǔn)菌株:糞腸球菌有證標(biāo)準(zhǔn)菌株，大廠埃希氏菌有證標(biāo)準(zhǔn)菌株。
4.無(wú)菌水:實(shí)驗(yàn)室一級(jí)純水，經(jīng)121℃高壓蒸氣滅菌20min。
5.硫代硫酸鈉:純度≥98%。
6.硫代硫酸鈉溶液(5.0g/L)
稱取0.5g硫代硫酸鈉，精確至0.1g，溶于適量水中，定容至100mL，121℃高壓滅菌20min。
7.磷酸鹽緩沖液:
氯化鈉                8.01g
氯化鉀                0.2g
磷酸氫二鈉            1.44g
磷酸二氫鉀            0.24g
上述成分溶解于950mL無(wú)菌水中，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值到7.4后加無(wú)菌水定容至1000mL，121℃高壓滅菌20min，備用。

檢測(cè)儀器

1.采樣瓶:具螺旋蓋或磨口塞的100mL、500mL玻璃瓶。
2.恒溫培養(yǎng)箱:允許溫度偏差41℃±1℃。
3.高壓蒸汽滅菌器:121℃可調(diào)。
4.程控定量封口機(jī):用于定量盤(pán)的封口。
5.紫外燈及配套燈箱:366nm。
6.定量盤(pán):51孔或97孔。
7.天平:精確至0.001g。
8.容量瓶:10mL和100mL。

檢測(cè)步驟

首先是定性分析
用滅菌處理過(guò)的100mL采樣瓶量取100mL水樣，加入一包培養(yǎng)基，混搖均勻使之完全溶解，放入恒溫培養(yǎng)箱中41℃±1℃培養(yǎng)24h。
其次是定量分析
用滅菌處理過(guò)的100mL采樣瓶量取100mL水樣，加入一包培養(yǎng)基，混搖均勻使之完全溶解。
將上述100mL水樣全部倒入51孔無(wú)菌定量盤(pán)內(nèi)，撫平定量盤(pán)背面以趕除孔穴內(nèi)氣泡，然后用程控定量封口機(jī)封口，放入恒溫培養(yǎng)箱中41℃±1℃培養(yǎng)24h。
空白對(duì)照可以用無(wú)菌水按照檢測(cè)步驟進(jìn)行操作。
定性結(jié)果
定性分析的水樣，在紫外燈下觀察，產(chǎn)生熒光，則判定為陽(yáng)性反應(yīng)；不產(chǎn)生熒光則判定為陰性反應(yīng)。
定量結(jié)果
在紫外燈下觀察培養(yǎng)24h定量盤(pán)，計(jì)數(shù)有熒光反應(yīng)的孔數(shù)，參照可信范圍表計(jì)數(shù)定量，結(jié)果以MPN/100mL表示。如所有孔穴均未產(chǎn)生熒光，則報(bào)告腸球菌“未檢出”。若熒光不明顯，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至28h進(jìn)行結(jié)果判讀，超過(guò)28h后出現(xiàn)的顏色反應(yīng)，不作為陽(yáng)性結(jié)果。